细胞培养步骤与仪器(细胞培养步骤)
导读 哈喽,大家好~~~我是小编田甜,关于细胞培养步骤与仪器,细胞培养步骤这个很多人还不知道,那么现在让田甜带着大家一起来看看吧!一、复苏1....
哈喽,大家好~~~我是小编田甜,关于细胞培养步骤与仪器,细胞培养步骤这个很多人还不知道,那么现在让田甜带着大家一起来看看吧!
一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。
液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。
吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
5.3天换一次培养基。
二、传代1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。
继续培养。
三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。
用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。
4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制: 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
要注意的就是无菌操作!。
本文分享完毕,希望对大家有所帮助哦。
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